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本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法。实验过程中可采取无毒的脱蜡剂去除石蜡，降低实验过程中对实验者的危害。组织裂解后，DNA结合于硅基包被磁珠表面。漂洗后，高纯度的DNA洗脱于TE或去离子水中。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。DNA的得率、片段大小与样品类型、储存条件及储存时间有很大关系。

• 获得样品后，要尽快将样品在4%～10%的福尔马林中固定，固定时间以14～24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久（＞1年）则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。
  
• 确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制Proteinase K的作用。
  
• 向20mg Proteinase K中加入1mL Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，以免影响其活性。
  
• 第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
  
• 使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。
  
• 如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2μL DNase-Free的RNase A（100mg/mL），试剂盒中的RNase A如果长时间不用，建议-20℃保存。
  
• 实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。
  
• Magbeads PN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads PN造成不可逆的损害。Magbeads PN每次使用时请充分振荡混合均匀。

• 石蜡包埋样本
  
  • 用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5～10μm的薄片。
    
  • 取约1×1cm2的切片(共约3～8片切片)置于离心管(自备)中，加入160μL Buffer DS，涡旋震荡10秒，再加入180μL Buffer GTL和20μL Proteinase K，涡旋震荡10秒。12000rpm，25℃离心1分钟。
    
    • 如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2～3片弃掉不用。
      
    • DS低于18℃会凝固，如果凝固不影响下面的实验。
  • 56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。样品室温静置30秒后25℃、12000rpm离心1分钟，用移液器沿管壁小心吸取下层水相(约180μL)于新离心管中，尽量避免吸入蜡液和管底沉淀。
    
    • 56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
      
    • 可选步骤：加入7μL UNG(1U/μL)，50℃，5min，不震荡。此步骤的目的是降低低频发生的C>T | G>A转换(人为突变)，同时有效保留真实发生的突变，从而使假阳性风险降至最低。。
  • 可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向水相中加入2μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2min。
    
  • 加入20μL Proteinase K，65℃，450rpm孵育15min，形成Lysate
• 福尔马林等固定液中的样本
  
  • 取约20mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μL 10mM PBS(pH7.4)，涡旋振荡，12000rpm(～13400×g)离心1分钟，弃上清，重复3次。
    
  • 上述管中加入180μL Buffer GTL，20μL Proteinase K，涡旋震荡混匀。
    
  • 56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。样品室温静置30秒后25℃、12000rpm离心1分钟，用移液器沿管壁小心吸取下层水相(约180μL)于新离心管中，尽量避免吸入蜡液和管底沉淀。
    
    • 56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
      
    • 可选步骤：加入7μL UNG(1U/μL)，50℃，5min，不震荡。此步骤的目的是降低低频发生的C>T | G>A转换(人为突变)，同时有效保留真实发生的突变，从而使假阳性风险降至最低。
  • 可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向水相中加入2μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2min。
    
  • 加入20μL Proteinase K，65℃，450rpm孵育15min，形成Lysate。

• 向Lysate中加入200μL Buffer GL并涡旋震荡混匀。
  
• 向离心管中加入300μL异丙醇与20μL磁珠后涡旋震荡混匀5秒钟，之后将离心管固定于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合10分钟。
  
• 将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
  
• 向离心管中加入750μL Buffer GW1(使用前请检查是否已加入无水乙醇)，涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
  
• 将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
  
• 重复步骤4～5。
  
• 向离心管中加入750μL Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)，涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
  
• 将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
  
• 重复步骤7～8。
  
• 离心管短暂离心后，将其重新固定于磁力架上用移液器去除管底溶液，之后开盖室温放置5～10分钟使乙醇充分挥发。
  
• 向离心管中加入50～200μL Buffer TE后涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中，之后将离心管固定于56℃、1600rpm的恒温混匀上震荡洗脱10分钟。
  
• 将离心管固定于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。